医学免疫学- 免疫学检测技术
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1、免疫学检测技术免疫学检测技术Immunodiagnosis第一节第一节 抗原或抗体检测抗原或抗体检测I. Detection of antigens or antibodies一、抗原一、抗原-抗体反应的特点抗体反应的特点Specificity（一）高度特异性（一）高度特异性 Cross-reaction: common antigen 交叉反应：共同抗原交叉反应：共同抗原 Antiserum absorption 抗血清吸收抗血清吸收 1st antibody & 2nd antibody 一抗；二抗一抗；二抗Reversibility/invertibility: （二）可逆性（二
2、）可逆性 non-covalent, surface-binding , dissociable 非共价、表面结合，可解离非共价、表面结合，可解离 complementary capacity: affinity; avidity 互补程度：亲和力互补程度：亲和力 ； 亲合力亲合力Visibility（三）可见性的条件（三）可见性的条件Compatible concentrations of antigen and antibody combined in proportion at or near equivalence Antigen: multivalent; Antibody(IgG)
3、: divalent 比例适合：抗原多价，抗体比例适合：抗原多价，抗体2价。交织成网。价。交织成网。Ph value; Temperature; Ionic concentration 条件适宜：酸碱度、温度、离子浓度条件适宜：酸碱度、温度、离子浓度Adequate concentration, binding strength; reaction time 足够浓度、结合强度和反应时间足够浓度、结合强度和反应时间Prozone phenomenon前带现象前带现象二、抗原二、抗原-抗体反应的应用抗体反应的应用Terms 术语术语Serological reaction 血清学反应血清学反应Q
4、ualitative analysis 定性定性Quantitation 定量定量Orientation 定位定位Titration 滴定滴定Titer 效价效价/滴度滴度三、常用的抗原三、常用的抗原-抗体反应技术抗体反应技术经典技术经典技术中和反应中和反应补体结合反应补体结合反应凝集反应凝集反应沉淀反应沉淀反应I ) Agglutination（一）凝集反应：（一）凝集反应：颗粒性抗原颗粒性抗原或或包被有可溶性抗原的颗粒包被有可溶性抗原的颗粒 + 相应抗体相应抗体肉眼可见的凝集肉眼可见的凝集块块 1. 直接凝集直接凝集 颗粒性抗原颗粒性抗原+ 相应抗体相应抗体 玻片凝集：抗原定性玻片凝集：抗
5、原定性 （ABO血型血型） 试管凝集：抗体定量试管凝集：抗体定量 （肥达反应）（肥达反应） 2. 间接凝集间接凝集 包被有可溶性抗原的颗粒包被有可溶性抗原的颗粒 + 相应抗体相应抗体 红细胞（间接血凝）；乳胶（间接乳凝）红细胞（间接血凝）；乳胶（间接乳凝） Coombs Test: 红细胞（红细胞（Rh抗原）抗原）+ 不完全抗体不完全抗体 + 抗人球蛋白抗人球蛋白 3. 派生的试验派生的试验 反向间接凝集反应：包被抗体的颗粒反向间接凝集反应：包被抗体的颗粒 + 抗原抗原 间接凝集抑制反应：间接凝集抑制反应： （乳胶妊娠试验乳胶妊娠试验） 抗体抗体 + 未知抗原未知抗原 + 包被有相应可溶性抗原
6、的颗粒包被有相应可溶性抗原的颗粒 凝集？凝集？HaemagglutinationII ) Precipitation （二）沉淀反应（二）沉淀反应 可溶性抗原可溶性抗原 + 相应抗体相应抗体肉眼可见的沉淀物肉眼可见的沉淀物 使用半固体琼脂凝胶为使用半固体琼脂凝胶为介质介质琼脂扩散琼脂扩散/免疫扩散免疫扩散1. 单向免疫扩散：抗原单向免疫扩散：抗原 的的定量（定量（Ig、C3 ）2. 双向免疫扩散：抗原双向免疫扩散：抗原/抗体的抗体的定性、组成及定性、组成及Ag相关性分析相关性分析3. 免疫电泳：免疫电泳： 电泳电泳 + 双向免疫扩散双向免疫扩散 （抗原分析）（抗原分析）4. 对流电泳：对流电泳
7、： 双向免疫扩散双向免疫扩散 + 电泳电泳 （抗原（抗原/抗体定性）抗体定性）5. 火箭电泳：火箭电泳： 单向免疫扩散单向免疫扩散 + 电泳电泳 （抗原定量）（抗原定量）6. 免疫比浊：免疫比浊： 抗体抗体 + 递增量抗原递增量抗原比浊比浊（抗原定量）（抗原定量）III ) Immunolabelling Techniques （三）免疫标记技术（三）免疫标记技术标记物：标记物： 荧光素、酶、放射性核素、电子致密物质、化学发光物质荧光素、酶、放射性核素、电子致密物质、化学发光物质标记对象：抗原或抗体标记对象：抗原或抗体用途：用途： 定性、定量、定位定性、定量、定位1. 免疫荧光法（免疫荧光法（
8、IFA ） 荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位荧光素可双色；使免疫复合物呈荧光；可定性、定位 （1）直接荧光法）直接荧光法 （2）间接荧光法：）间接荧光法： 荧光素一抗荧光素一抗 荧光素二抗荧光素二抗 对每种抗体作标记对每种抗体作标记 不必标记每种抗体不必标记每种抗体 特异特异 敏感敏感 测测Ag 测测Ag/Ab免疫荧光法免疫荧光法2. 酶免疫测定酶免疫测定（EIA）: ELISA与酶免疫组化与酶免疫组化（1）双抗体夹心法）双抗体夹心法ELISA：查抗原：查抗原（2）间接法）间接法ELISA： 查抗体查抗体（3）BAS-ELISA ： Biotin-Avidin-酶放大系统酶放大系
