实验三细菌的分布与外界因素对细菌的影响

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1、细菌的分布与外界因素细菌的分布与外界因素对细菌的影响对细菌的影响右江民族医学院微生物与免疫学教研室右江民族医学院微生物与免疫学教研室实验目的实验目的. .掌握皮肤消毒方法掌握皮肤消毒方法. .掌握标准纸片扩散法（）的原理、操作掌握标准纸片扩散法（）的原理、操作方法、结果的判读与解释及临床意义方法、结果的判读与解释及临床意义. .掌握纸片扩散法的质量控制方法掌握纸片扩散法的质量控制方法. .熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法熟悉人体皮肤、咽喉部细菌检查方法. .熟悉紫外线灭菌方法熟悉紫外线灭菌方法. .了解空气、水中细菌的检查方法了解空气、水中细菌的检查方法. .了解高压蒸汽灭菌方法了解高压蒸汽灭

2、菌方法试验内容试验内容一、细菌的分布检查一、细菌的分布检查. .空气中细菌的检查空气中细菌的检查. .水中细菌的检查水中细菌的检查. .皮肤消毒试验皮肤消毒试验. .飞沫中细菌的检查飞沫中细菌的检查二、外界因素对细菌二、外界因素对细菌的影响的影响. .高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法. .紫外线杀菌试验紫外线杀菌试验 . .药物敏感试验药物敏感试验一、细菌的分布检查一、细菌的分布检查 了解微生物在自然界及正常人体的分布，了解微生物在自然界及正常人体的分布，对于在医疗实践及某些科学实验中树立无对于在医疗实践及某些科学实验中树立无菌观念有着重要的意义。菌观念有着重要的意义。 材料材料普通琼脂平板普通琼

3、脂平板血琼脂平板血琼脂平板 MHMH琼脂平板琼脂平板温箱温箱无菌棉签等无菌棉签等普通琼脂平板普通琼脂平板血琼脂平板血琼脂平板空气中细菌的检查（示教）空气中细菌的检查（示教） 左边培养皿菌落是未被过滤空气中的细菌，右边是经过滤空气中留有的少量细菌 水中细菌的检查（示教）水中细菌的检查（示教） 取水样取水样1ml 注入无菌空平皿内注入无菌空平皿内 加加15mL已融化并冷却至约已融化并冷却至约45的培养基混匀的培养基混匀 倒置于倒置于温箱培养温箱培养18-18-h后观察结果后观察结果 1.1.分区标记分区标记 2.2.接种接种 3.3.培养培养皮肤细菌的检查皮肤细菌的检查：空白对照空白对照消毒后消毒

4、后消毒前消毒前常用的皮肤消毒剂常用的皮肤消毒剂飞沫中细菌的检查飞沫中细菌的检查用咳碟法用咳碟法将咽喉部将咽喉部细菌接种细菌接种于血平板于血平板二、外界因素对细菌的影响二、外界因素对细菌的影响 当外界环境条件发生巨大改变，可导当外界环境条件发生巨大改变，可导致微生物的主要代谢活动发生障碍，生致微生物的主要代谢活动发生障碍，生长停顿，甚至死亡。长停顿，甚至死亡。1.1.高压蒸汽灭菌法（示教）高压蒸汽灭菌法（示教） 原理：原理：利用密闭的金属锅，密闭加利用密闭的金属锅，密闭加热使锅内蒸汽压力增大，温度随之热使锅内蒸汽压力增大，温度随之升高，杀菌力增强。升高，杀菌力增强。高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器手

5、提式高压蒸手提式高压蒸汽灭菌器汽灭菌器高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器构造：构造：高压蒸汽灭菌器高压蒸汽灭菌器是一个双层的金属圆是一个双层的金属圆筒，两层之间盛水，筒，两层之间盛水，外层坚厚，其上方或外层坚厚，其上方或前方有金属厚盖。盖前方有金属厚盖。盖旁附有螺旋，借以紧旁附有螺旋，借以紧闭盖门，使蒸汽不能闭盖门，使蒸汽不能外溢，因而蒸汽压力外溢，因而蒸汽压力升高，其温度亦相应升高，其温度亦相应的增高。的增高。 1.1.加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。加水至外筒内，被灭菌物品放入内筒。2.2.盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。盖上灭菌器盖，拧紧螺旋使之密闭。3.3.加热，同时打开排气阀门，排净其中

6、冷空气，关加热，同时打开排气阀门，排净其中冷空气，关闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压闭排气阀。继续加热，待压力表渐渐升至所需压力时力时( (103.4kPa,121.3103.4kPa,121.3) )，保持压力和温度维持，保持压力和温度维持151530min30min。4.4.待压力自行降至零时，慢慢打开排气阀，排除余待压力自行降至零时，慢慢打开排气阀，排除余气，开盖取物。气，开盖取物。切不可在压力尚未降低为零时突切不可在压力尚未降低为零时突然打开排气阀门，以免瓶内液体等冲出外溢然打开排气阀门，以免瓶内液体等冲出外溢。 使用方法使用方法用用 途途 凡耐高温和潮湿的物品，如培养基、凡

7、耐高温和潮湿的物品，如培养基、生理盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、生理盐水、衣服、纱布、棉花、敷料、玻璃器材、传染性污物等都可应用本法玻璃器材、传染性污物等都可应用本法灭菌。灭菌。 2 2、紫外线杀菌试验、紫外线杀菌试验 原理：原理：通过紫外线的照射，破坏及改变通过紫外线的照射，破坏及改变微生物的微生物的DNADNA结构，使细菌当即死亡或不结构，使细菌当即死亡或不能繁殖后代，达到杀菌的目的。能繁殖后代，达到杀菌的目的。优点优点 简单便捷、广简单便捷、广谱高效、无二次污谱高效、无二次污染、便于治理和实染、便于治理和实现自动化等优点。现自动化等优点。缺点缺点穿透能力弱穿透能力弱特特 点点材材 料料普

8、通琼脂平板普通琼脂平板18-24h18-24h细菌培养物细菌培养物紫外线灯等紫外线灯等方方 法法 细菌接种于普通琼脂平板上细菌接种于普通琼脂平板上 打开皿盖，放置于紫外灯下打开皿盖，放置于紫外灯下约约30cm30cm处，用盖子盖住半边处，用盖子盖住半边做对照，照射半小时后盖好做对照，照射半小时后盖好盖子。盖子。 培养培养药物敏感试验药物敏感试验 目前临床微生物实验室进行药目前临床微生物实验室进行药敏试验的方法主要有纸片扩散法、敏试验的方法主要有纸片扩散法、稀释法、抗生素浓度法、自动化稀释法、抗生素浓度法、自动化仪器等仪器等标准纸片扩散法（）标准纸片扩散法（）原理：原理：将含有定量抗生素的滤纸片

9、贴在已接将含有定量抗生素的滤纸片贴在已接种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物种了测试菌的琼脂表面上，纸片中的药物在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗生在琼脂中扩散，随着扩散距离的增加抗生素的浓度呈对数减少素的浓度呈对数减少, ,在药物浓度到达的范在药物浓度到达的范围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透围内对此药敏感的细菌不能生长而形成透明的抑菌圈，不同细菌形成的抑菌圈各不明的抑菌圈，不同细菌形成的抑菌圈各不相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药相同，抑菌圈的大小反映了测试菌对该药的敏感程度，并与该药物对测试菌的最低的敏感程度，并与该药物对测试菌的最低抑菌浓度（抑菌浓度（MICMIC）呈负相关。）呈负

10、相关。材材 料料菌种：葡萄球菌、大肠杆菌菌液菌种：葡萄球菌、大肠杆菌菌液培养基：水解酪蛋白琼脂（培养基：水解酪蛋白琼脂（MHMH琼脂）琼脂）试剂：各种抗菌药物纸片（试剂：各种抗菌药物纸片（PENPEN、GENGEN、STRSTR、CHLCHL) )方方 法法 用灭菌棉试蘸取试验菌涂用灭菌棉试蘸取试验菌涂抹在抹在MHMH培养基表面，要均培养基表面，要均匀涂抹匀涂抹3 3次，室温下待干燥次，室温下待干燥 以无菌镊子以无菌镊子( (烧灼灭菌，注烧灼灭菌，注意镊子要冷却意镊子要冷却）取各抗生）取各抗生素纸片贴于表面素纸片贴于表面 培养培养各纸片中心距24mm,纸片距平板边缘应15mmPENGENSTR

11、CHL结果判断结果判断 用毫米尺量取抑用毫米尺量取抑菌圈直径，参考试验菌圈直径，参考试验指导指导表表3-63-6的标准判的标准判读结果，按敏感读结果，按敏感（S S）、中介（）、中介（I I）、）、耐药（耐药（R R）报告。）报告。材材 料料 分分 配配分组分组两人一组两人一组菌种菌种金葡菌、大金葡菌、大肠杆菌各一支肠杆菌各一支培养基培养基2 2块块普通平板普通平板/ /组（组（皮肤细菌的检查、紫皮肤细菌的检查、紫外线杀菌试验外线杀菌试验）2 2块块MHMH平板平板/ /组（组（药物敏感试验药物敏感试验）1 1块血平板块血平板/ /组（组（咽喉部细菌的检查咽喉部细菌的检查）抗菌药物抗菌药物耐药耐药中介中介敏感敏感青霉素青霉素28282929庆大霉素庆大霉素 12 1213-1413-14 15 15链霉素链霉素 11 1112-1412-14 15 15氯霉素氯霉素 12 1213-1713-17 18 18纸片法药敏试验结果解释纸片法药敏试验结果解释