放射免疫检测技术

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1、放射免疫检测技术基本内容基本内容一、一、放射免疫检测技术的基本原理放射免疫检测技术的基本原理二、二、放射免疫分析（放射免疫分析（RIA）三、三、免疫放射分析（免疫放射分析（IRMA）四、四、RIA与与IRMA的比较的比较五、放射免疫分析中造成测量误差的因素五、放射免疫分析中造成测量误差的因素六、核废物的处理六、核废物的处理七、应用七、应用八、课堂小结八、课堂小结九、作业九、作业一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理1、7个基本概念个基本概念2、常用的放射性核素、常用的放射性核素3、放射性核素的选择原则、放射性核素的选择原则4、放射性标记的抗原或抗体的要求、放射性标记的抗原

2、或抗体的要求5、制备放射性核素标记物、制备放射性核素标记物6、放射性标记物的纯化、放射性标记物的纯化7、理想的分离技术、理想的分离技术8、免疫复合物分离常用方法、免疫复合物分离常用方法9、核射线探测仪器的探测原理、核射线探测仪器的探测原理1、7个基本概念个基本概念放射性核素放射性核素：是指原子核能自发地产生成分或是指原子核能自发地产生成分或能级的变化，能级的变化，在在变化时伴有射线的发射变化时伴有射线的发射（放射（放射性），性），然后变成另一种然后变成另一种元素的元素的核素。核素。 一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理放射量单位有放射量单位有: 放射性活度放射性活度 放

3、射性比活度放射性比活度 放射性浓度放射性浓度1、7个基本概念个基本概念放射性活度放射性活度：一定量的放射性核素在一定量的放射性核素在单位时间内的核衰变数，即每秒单位时间内的核衰变数，即每秒核核衰变衰变次数次数。单位：单位：贝可勒尔贝可勒尔(Becquerel，Bq) 1Ci=3.71010Bq 一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理1、7个基本概念个基本概念放射性比活度放射性比活度：是指是指固体样品固体样品的放射的放射性活度，即性活度，即单位质量样品中所含放射性单位质量样品中所含放射性活度，以活度，以Bq/g或或Bq/mmol表示表示 。放射性浓度放射性浓度：是指是指液体

4、样品液体样品的放射性的放射性活度，即活度，即单位体积溶液中所含放射性活单位体积溶液中所含放射性活度，以度，以Bq/ml表示。表示。一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理1、7个基本概念个基本概念比活度：比活度：是是单位质量单位质量标记物的放射强度，标记物的放射强度，单位为单位为Bq/ g。 标记抗原的比放射性越高，所需标记标记抗原的比放射性越高，所需标记抗原量越少，实验系统的敏感度越高。抗原量越少，实验系统的敏感度越高。 但过高的比放射性可能会损伤抗原的但过高的比放射性可能会损伤抗原的免疫活性。如碘标记化合物以单碘标记为免疫活性。如碘标记化合物以单碘标记为宜。宜。 一、放

5、射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理1、7个基本概念个基本概念放射化学纯度：放射化学纯度：是指结合于抗原上的放是指结合于抗原上的放射强度占总放射强度的百分率。射强度占总放射强度的百分率。 影响因素影响因素: :被标记物不纯，杂质也被放射性核素标被标记物不纯，杂质也被放射性核素标记；记；标记后的分离纯化不完全；标记后的分离纯化不完全；标记化合物贮存过程中的碘脱落。标记化合物贮存过程中的碘脱落。一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理1、7个基本概念个基本概念免疫活性：免疫活性：指标记抗原结合于抗体的指标记抗原结合于抗体的放射强度占总放射强度的百分率。放射强度

6、占总放射强度的百分率。 以以检查标记后免疫活性损失检查标记后免疫活性损失情况情况。一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理2、常用的放射性核素：、常用的放射性核素： 放射性核素依据放射性核素依据衰变方式分衰变方式分、三三种，用于放射性标记的有种，用于放射性标记的有和和两类两类;分别分别用用液体闪烁计数器液体闪烁计数器及及计数器计数器测定。测定。 型：型：3 3H H（最常用）、（最常用）、1414C C和和3232P P。 型：型：125125I I（最常用）、（最常用）、131131I I、5151CrCr和和6060CoCo。一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检

7、测技术的基本原理125I和和3H标记物特点比较标记物特点比较 125125I I标记物标记物3 3H H标记物标记物标记方法标记方法方法简便，易获得高方法简便，易获得高比放射性标记物比放射性标记物方法较难，不易获得高方法较难，不易获得高比放射性标记物比放射性标记物对标记化合对标记化合物影响物影响标记时以标记时以I I代替代替H1H1改变改变物质结构，可影响抗物质结构，可影响抗原免疫学活性原免疫学活性不改变抗原结构，一般不改变抗原结构，一般不影响抗原免疫活性不影响抗原免疫活性测量方法测量方法方法简便、效率高方法简便、效率高方法复杂，效率低方法复杂，效率低测量仪器测量仪器计数器计数器液体闪烁计数器

8、液体闪烁计数器半衰期半衰期60.260.2天天约约1111年年废弃物废弃物处理容易处理容易较难较难3、放射性核素选择原则放射性核素选择原则 高比活度、适宜半衰期、对抗原或抗高比活度、适宜半衰期、对抗原或抗体没损害体没损害、容易标记。容易标记。4、放射性放射性标记的抗原标记的抗原或抗体的或抗体的要求要求 纯度高纯度高、灵敏、灵敏、有足够或完整的免疫有足够或完整的免疫活性活性、高亲和常数、高亲和常数、特异性强、特异性强、交叉反应交叉反应率低。率低。一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理5、制备放射性核素标记物、制备放射性核素标记物直接标记法直接标记法 将将125I直接结合在蛋

9、白质侧链的直接结合在蛋白质侧链的酪氨酸残酪氨酸残基苯环基苯环上，形成单碘酪氨酸或双碘酪氨酸。上，形成单碘酪氨酸或双碘酪氨酸。 操作简便，结合效率高，但只能标记含酪氨操作简便，结合效率高，但只能标记含酪氨酸的化合物，有时可能会损害蛋白质的活性酸的化合物，有时可能会损害蛋白质的活性。间接标记法间接标记法 先将放射性碘连接到一个先将放射性碘连接到一个小分子载体小分子载体上上，再将这个小分子载体与蛋白质结合。，再将这个小分子载体与蛋白质结合。一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理 6、放射性标记物的纯化放射性标记物的纯化 可用可用葡聚糖凝胶过滤法葡聚糖凝胶过滤法或或薄层层析法薄层

10、层析法、纸层析法纸层析法、电泳法电泳法、高效液相层析法高效液相层析法等。等。 理想的放射性标记物理想的放射性标记物： 高放射化学纯度高放射化学纯度 适当的比放射性适当的比放射性 高的高的免疫活性。免疫活性。 一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理7、理想的分离技术理想的分离技术简便易行，适于大批量样品分析简便易行，适于大批量样品分析;分离效果完全、快速，非特异结合低分离效果完全、快速，非特异结合低;试剂来源容易、价格低廉、稳定性好、可长试剂来源容易、价格低廉、稳定性好、可长期保存期保存; 不受外界因素和样品中其他组分的干扰，对不受外界因素和样品中其他组分的干扰，对标准品和

11、待测抗原分离效果相同标准品和待测抗原分离效果相同;适合自动化分析的要求。适合自动化分析的要求。 一、放射免疫检测技术的基本原理一、放射免疫检测技术的基本原理8、免疫复合物分离常用方法免疫复合物分离常用方法.吸附法吸附法 用吸附剂用吸附剂 (如活性炭如活性炭)吸附小分子的游离。吸附小分子的游离。.化学沉淀法化学沉淀法 RIA反应条件接近抗体的等电点，加入聚乙二醇反应条件接近抗体的等电点，加入聚乙二醇(PEG)等蛋白质沉淀等蛋白质沉淀剂可破坏蛋白分子表面的水化层而使蛋白沉淀，从而分离剂可破坏蛋白分子表面的水化层而使蛋白沉淀，从而分离B与与F。.双抗体法双抗体法 利用抗抗体和利用抗抗体和Ag-Ab复