基因工程基本操作程序

《基因工程基本操作程序》由会员分享，可在线阅读，更多相关《基因工程基本操作程序（26页珍藏版）》请在文档大全上搜索。

1、 基因工程的基本操作程序苏云金芽孢杆菌含有一种可以合成毒蛋白的基因。让细菌的毒蛋白基因在棉花细胞中表达，可培育出抵抗棉铃虫害的抗虫棉。想一想需要做哪些关键工作？苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌毒蛋白基因毒蛋白基因苏云金芽孢杆菌苏云金芽孢杆菌棉花细胞棉花细胞 基因工程的基本操作程序一、目的基因的获取一、目的基因的获取二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞四、目的基因的检测与鉴定四、目的基因的检测与鉴定一、一、目的目的基因基因的获取的获取主要是主要是编码蛋白质的结构基因编码蛋白质的结构基因获取方法：获取方法：1、从基因文库中获取目的基因、从基因

2、文库中获取目的基因2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3、化学方法人工合成、化学方法人工合成外显子内含子与RNA聚合酶结合位点编码区非编码区非编码区非编码区非编码区与RNA聚合酶结合位点编码区原核生物基因原核生物基因真核生物基因真核生物基因补充补充:1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多将含有某种生物不同基因的许多DNADNA片断，导入到片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为同基因，称为基因文库基因文库。基因文库基因文库 基因组文库基因组文库部分基因文库部

3、分基因文库(CDNA文库文库)某生物体内某生物体内全部全部DNADNA 许多许多DNADNA片段片段受体菌群体受体菌群体1、从基因文库中获取目的基因、从基因文库中获取目的基因限制酶限制酶与运载体连接与运载体连接 导入导入基因组文库基因组文库某种生物某个时期的某种生物某个时期的mRNAmRNAcDNAcDNA反转录反转录受体菌群体受体菌群体与运载体连接与运载体连接 导入导入部分基因文库部分基因文库（cDNA文库）文库）概念：概念：原理：原理：PCRPCR全称为聚合酶链式反应，是一项在生全称为聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定物体外复制特定DNADNA片段的核酸合成技术片段的核酸合成技术 。

4、体外体外DNADNA复制复制一段已知目的基因的核苷酸序列，以便一段已知目的基因的核苷酸序列，以便根据这一序列合成引物。根据这一序列合成引物。（1 1）模板）模板DNADNA( ( 需含有目的基因需含有目的基因 ) ) （2 2）四种脱氧核苷酸）四种脱氧核苷酸(dNTP)(dNTP) （3 3）耐高温的）耐高温的DNADNA聚合酶聚合酶(Taq(Taq酶）酶）2、利用、利用PCR技术扩增目的基因技术扩增目的基因3、通过、通过DNA合成仪用化学方法人工合成合成仪用化学方法人工合成推推测测推推测测合合成成 当当基因比较小基因比较小、蛋白质的氨基酸序列可以测得或、蛋白质的氨基酸序列可以测得或核苷核苷酸

5、序列已知酸序列已知时，可采用此种方法。时，可采用此种方法。二、基因表达载体的构建二、基因表达载体的构建-核心核心基因表达载体的构建过程基因表达载体的构建过程质粒质粒DNADNA分子分子限制酶处理限制酶处理两个切口两个切口获得目的基因获得目的基因DNADNA连接酶连接酶重组重组DNADNA分子（重组质粒）分子（重组质粒）同一种同一种一个切口一个切口两个黏性末端两个黏性末端复制原点复制原点+启动子启动子+目的基因目的基因+终止子终止子+标志基因标志基因基因表达载体的组成三、将目的基因导入受体细胞三、将目的基因导入受体细胞 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和