血清γ-球蛋白的分离、纯化(实验六)

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1、 1.1.了解并初步掌握盐析法分离、纯化蛋白质的原理。了解并初步掌握盐析法分离、纯化蛋白质的原理。2.2.熟悉盐析法分离、纯化蛋白质的方法。熟悉盐析法分离、纯化蛋白质的方法。 （一）蛋白质盐析（一）蛋白质盐析 在水溶液中，蛋白质分子由于表面生成在水溶液中，蛋白质分子由于表面生成水化层水化层和和同性同性电荷层电荷层而成为稳定的亲水胶体颗粒，因此蛋而成为稳定的亲水胶体颗粒，因此蛋白质在水溶液中比较稳定而白质在水溶液中比较稳定而不易沉淀不易沉淀。 当加入当加入较高浓度较高浓度的的中性盐中性盐时，这些盐类时，这些盐类与水有亲与水有亲和性和性，与蛋白质争夺水分，破坏蛋白质颗粒表面，与蛋白质争夺水分，破坏

2、蛋白质颗粒表面的水化膜。同时，由于这些盐是的水化膜。同时，由于这些盐是强电解质强电解质，离子，离子浓度相对的比较高，可以大量中和蛋白质颗粒上浓度相对的比较高，可以大量中和蛋白质颗粒上的电荷，这样使蛋白质成了既不含水膜又不带电的电荷，这样使蛋白质成了既不含水膜又不带电荷的不稳定颗粒而容易沉淀，这就是利用荷的不稳定颗粒而容易沉淀，这就是利用盐析沉盐析沉淀蛋白质的基本原理淀蛋白质的基本原理。 由于血清中各种蛋白质所带电荷多少、颗粒大小由于血清中各种蛋白质所带电荷多少、颗粒大小及亲水程度都不一样，因此使用某种中性盐进行及亲水程度都不一样，因此使用某种中性盐进行盐析时，所需要的盐浓度也各不相同。盐析时，

3、所需要的盐浓度也各不相同。 50%50%饱和度饱和度的硫酸铵能使的硫酸铵能使血清中的球蛋白血清中的球蛋白沉淀，而沉淀，而3333饱和度饱和度的硫酸铵则使的硫酸铵则使-球蛋白球蛋白沉淀。沉淀。 可根据所要分离的蛋白质，选择不同饱和度的硫可根据所要分离的蛋白质，选择不同饱和度的硫酸铵溶液进行盐析。酸铵溶液进行盐析。 （二）浓缩（二）浓缩 一般实验室常用的是一般实验室常用的是透析袋（半透膜）透析袋（半透膜）浓缩。浓缩。 半透膜半透膜具有选择透过性，只允许具有选择透过性，只允许离子离子和和小分子小分子扩扩散进出，散进出，生物大分子生物大分子（蛋白质等）不能自由通过（蛋白质等）不能自由通过半透膜。半透膜