乳酸菌检验操作规范培训

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1、目录目录一、乳酸菌一、乳酸菌二、仪器设备二、仪器设备三、三、 培养基培养基四、无菌室准备四、无菌室准备五、接种培养五、接种培养六、菌落计数六、菌落计数七、乳酸菌在改进七、乳酸菌在改进MC培养基上菌落特征培养基上菌落特征八、过氧化氢酶试验八、过氧化氢酶试验第二页，共38页。一、一、乳酸菌乳酸菌1 1、乳酸菌的概念、乳酸菌的概念乳酸菌一词并非生物分类学名词，而是指能乳酸菌一词并非生物分类学名词，而是指能够利用发酵性糖类产生大量乳酸的一类微生够利用发酵性糖类产生大量乳酸的一类微生物的统称。物的统称。通常将乳酸细菌之类群称为乳酸菌。通常将乳酸细菌之类群称为乳酸菌。第三页，共38页。2 2、乳酸菌主要分

2、布、乳酸菌主要分布乳杆菌属乳杆菌属LactobacillusLactobacillus 链球菌属链球菌属StreptococcusStreptococcus明串珠菌属明串珠菌属LeuconostocLeuconostoc片球菌属片球菌属PediococcusPediococcus双歧杆菌属双歧杆菌属BifidobacteriumBifidobacterium第四页，共38页。一乳杆菌属一乳杆菌属LactobacillusLactobacillus1乳杆菌属的形态特征乳杆菌属的形态特征 细胞呈杆状，多为长杆状、短杆状及棒杆状，一般成短细胞呈杆状，多为长杆状、短杆状及棒杆状，一般成短链排列。革兰氏

3、染色阳性，通常不运动，无芽孢。链排列。革兰氏染色阳性，通常不运动，无芽孢。第五页，共38页。2乳杆菌属的生物学特点乳杆菌属的生物学特点 化能异养型，营养要求严格，生长繁殖需要多种氨化能异养型，营养要求严格，生长繁殖需要多种氨基酸、维生素、肽、核酸衍生物。基酸、维生素、肽、核酸衍生物。 厌氧、耐氧性厌氧或兼性厌氧厌氧、耐氧性厌氧或兼性厌氧 生长最适生长最适pH为为5.56.2，在，在pH5的环境中可生长，而中性的环境中可生长，而中性或初始碱性条件下生长速率降低。或初始碱性条件下生长速率降低。生长温度范围，生长温度范围，253，最适生长温度，最适生长温度3040。 第六页，共38页。3乳杆菌属的代

4、表种乳杆菌属的代表种 3.1保加利亚乳杆菌保加利亚乳杆菌L.bulgaricus细胞形态长杆状，两端钝圆。细胞形态长杆状，两端钝圆。固体培养基生长的菌落呈棉花状，易与其它乳酸菌区别。固体培养基生长的菌落呈棉花状，易与其它乳酸菌区别。能利用葡萄糖、果糖、乳糖进展同型乳酸发酵产生能利用葡萄糖、果糖、乳糖进展同型乳酸发酵产生D型乳酸有酸涩味，适口性差，不能利用蔗糖。型乳酸有酸涩味，适口性差，不能利用蔗糖。第七页，共38页。该菌是乳酸菌中产酸能力最强的菌种。该菌是乳酸菌中产酸能力最强的菌种。蛋白质分解力较弱，发酵乳中可产生香味物质蛋白质分解力较弱，发酵乳中可产生香味物质乙醛。乙醛。最适生长温度最适生长

5、温度3745，温度高于，温度高于50或低于或低于20不生长。不生长。常作为发酵酸奶的生产菌。常作为发酵酸奶的生产菌。 第八页，共38页。3.2嗜酸乳杆菌嗜酸乳杆菌L.acidophilus 细胞形态比保加利亚乳杆菌小，呈细长杆状，能利细胞形态比保加利亚乳杆菌小，呈细长杆状，能利用葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖进展同型乳酸发酵产用葡萄糖、果糖、乳糖、蔗糖进展同型乳酸发酵产生乳酸。生乳酸。最适生长温度最适生长温度37，20以下不生长，耐热性差。蛋以下不生长，耐热性差。蛋白质分解力较弱。白质分解力较弱。 第九页，共38页。最适生长最适生长pH 5.56.0，耐酸性强，能在其它乳酸菌，耐酸性强，能在其它乳酸

6、菌不能生长的酸性环境中生长繁殖。不能生长的酸性环境中生长繁殖。嗜酸乳杆菌是能够在人体肠道定殖的少数有益微生物嗜酸乳杆菌是能够在人体肠道定殖的少数有益微生物菌群之一，其代谢产物有机酸和抗菌物质菌群之一，其代谢产物有机酸和抗菌物质乳杆菌素乳杆菌素可抑制病原菌和腐败菌的生长。可抑制病原菌和腐败菌的生长。 第十页，共38页。二链球菌属二链球菌属Streptococcus1链球菌属的形态特征链球菌属的形态特征 细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列。革兰氏染色细胞呈球形或卵圆形，成对或成链排列。革兰氏染色阳性，无芽孢，一般不运动，不产生色素。阳性，无芽孢，一般不运动，不产生色素。第十一页，共38页。2链球菌

7、属的生物学特点链球菌属的生物学特点 化能异养型，同型乳酸发酵产生右旋乳酸；化能异养型，同型乳酸发酵产生右旋乳酸；兼性厌氧型，接触酶反响阴性，厌氧培养生兼性厌氧型，接触酶反响阴性，厌氧培养生长良好。长良好。 第十二页，共38页。3链球菌属的代表种链球菌属的代表种 嗜热链球菌嗜热链球菌St.thermophilus 细胞形态呈链球状。细胞形态呈链球状。能利用葡萄糖、果糖、乳糖和蔗糖进展发酵产生乳酸能利用葡萄糖、果糖、乳糖和蔗糖进展发酵产生乳酸 。第十三页，共38页。蛋白质分解力较弱，在发酵乳中可产生香味物质双乙酰。蛋白质分解力较弱，在发酵乳中可产生香味物质双乙酰。 该菌主要特征是能在高温条件下产酸

8、，最适生长温度该菌主要特征是能在高温条件下产酸，最适生长温度4045，温度低于，温度低于20不产酸。耐热性强，能耐不产酸。耐热性强，能耐6568的高温。的高温。第十四页，共38页。三明串珠菌属三明串珠菌属Leuconostoc 菌落一般小于菌落一般小于1.0mm，光滑、圆形、灰白色，光滑、圆形、灰白色 细胞球形或豆状，成对或成链排列细胞球形或豆状，成对或成链排列 。革兰氏染色阳性，不运动，无芽孢。革兰氏染色阳性，不运动，无芽孢。第十五页，共38页。四双歧杆菌属四双歧杆菌属Bifidobacterium 1双歧杆菌属的形态特征双歧杆菌属的形态特征 细胞呈多样形态：细胞呈多样形态：Y字型、字型、V

9、字型、弯曲状、勺型，典字型、弯曲状、勺型，典型形态为分叉杆菌型形态为分叉杆菌 革兰氏染色阳性，亚甲基兰染色菌体着色不规那么。革兰氏染色阳性，亚甲基兰染色菌体着色不规那么。无芽孢和鞭毛，不运动。无芽孢和鞭毛，不运动。 第十六页，共38页。2双歧杆菌属的生物学特点双歧杆菌属的生物学特点 化能异养型，对营养要求苛刻，生长繁殖需要多种双化能异养型，对营养要求苛刻，生长繁殖需要多种双歧因子歧因子 。能利用葡萄糖、果糖、乳糖和半乳糖，生成乳酸和乙能利用葡萄糖、果糖、乳糖和半乳糖，生成乳酸和乙酸及少量的甲酸和琥珀酸。酸及少量的甲酸和琥珀酸。 蛋白质分解力微弱。蛋白质分解力微弱。第十七页，共38页。专性厌氧，

10、但不同菌种或菌株对氧的敏感性存在差专性厌氧，但不同菌种或菌株对氧的敏感性存在差异，屡次传代培养后，菌株的耐氧性增强。异，屡次传代培养后，菌株的耐氧性增强。生长温度范围生长温度范围2545，最适生长温度，最适生长温度37。生长生长pH值范围值范围4.58.5，最适生长起始，最适生长起始pH值值6.57.0，不，不耐酸，酸性环境耐酸，酸性环境pH5.5对菌体存活不利。对菌体存活不利。 第十八页，共38页。3、代表种、代表种 人体肠道中共有人体肠道中共有8种，其中数量最多的种，其中数量最多的5种为：种为：两歧双歧杆菌两歧双歧杆菌B.bifidum婴儿双歧杆菌婴儿双歧杆菌B.infantis青春双歧杆