液相色谱分析仪法

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1、2022-5-31高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法一、一、高效液相色谱高效液相色谱仪仪HPLC二、高效液相色谱法的特点二、高效液相色谱法的特点feature of HPLC三、流程及主要部件三、流程及主要部件general process and main assembly of HPLC四。固定相和流动相四。固定相和流动相主讲主讲主讲主讲主讲主讲: : : : : :王庆俐王庆俐王庆俐王庆俐王庆俐王庆俐high performance liquid chromatographfeature and instrumen

2、t of HPLC2022-5-31一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器一、液相色谱仪器 high performance liquid chromatographhigh performance liquid chromatographhigh performance liquid chromatograph 目前常见的目前常见的HPLC仪生产厂家仪生产厂家国外有国外有Waters公司、公司、Agilent公司公司（原（原HP公司）、岛津公司等，公司）、岛津公司等，国内有大连依利特公司、上海分国内有大连依利特公司、上海分析仪器厂、北京分析仪器厂等。

3、析仪器厂、北京分析仪器厂等。2022-5-31液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（1 1 1） high performance liquid chromatographhigh performance liquid chromatographhigh performance liquid chromatograph2022-5-31液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（2 2 2）2022-5-31液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（3 3 3）2022-5-31液相色谱仪（液相色谱仪（

4、液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（液相色谱仪（4 4 4）2022-5-31高效液相色谱仪高效液相色谱仪2022-5-31二二二. . .概论：概论：概论： 定义：定义：定义： 以液体为流动相的色谱法称为液相色法。以液体为流动相的色谱法称为液相色法。用用常压输送流动相常压输送流动相的方法为经典液相色谱的方法为经典液相色谱法，这种色谱法的柱效能低、分离周长。法，这种色谱法的柱效能低、分离周长。高效液相色谱法（高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，简称，简称HPLC）是在经典）是在经典液相色谱的基础上发展起来的一种色谱方液相色谱的基础上发展

5、起来的一种色谱方法。与经典的液相色谱法相比，高效液相法。与经典的液相色谱法相比，高效液相色谱法具有下列主要优点色谱法具有下列主要优点： 2022-5-311. 应用了颗粒极细（一般为应用了颗粒极细（一般为10m下）下）规则均匀的规则均匀的固定相固定相，柱效高，分离效，柱效高，分离效率高；率高；2. 采用采用高压输液泵高压输液泵输送流动相，流速快，输送流动相，流速快，一般试样的分析需数分钟，复杂试样一般试样的分析需数分钟，复杂试样分析在数十分钟内即可完成；分析在数十分钟内即可完成；3. 广泛使用了高灵敏广泛使用了高灵敏检测器检测器，大大提高，大大提高了灵敏度。目前，已发展了多种固定了灵敏度。目前

6、，已发展了多种固定相，有多种不同的分离模式，使高效相，有多种不同的分离模式，使高效液相色谱法的应用范围不断扩大液相色谱法的应用范围不断扩大。2022-5-31. . .色谱法分类色谱法分类色谱法分类色谱法分类色谱法分类色谱法分类 按两相的物理状态可分为：按两相的物理状态可分为： 气相色谱法气相色谱法(GC): 适用于分离挥发性化合物。有适用于分离挥发性化合物。有机物质中分子量小于机物质中分子量小于400的采用气相色谱法分析，的采用气相色谱法分析，此范围的物质约占有机物质总数此范围的物质约占有机物质总数15%20%. 液相色谱法液相色谱法(LC): 适用于分离低挥发性或非挥发适用于分离低挥发性或

7、非挥发性、热稳定性差的物质。性、热稳定性差的物质。 分子量为分子量为4002000的有机物质可采用液相色谱法的有机物质可采用液相色谱法分析，而分子量大于分析，而分子量大于2000的则须用凝胶色谱法。的则须用凝胶色谱法。2022-5-31按固定相性质及外形分类按固定相性质及外形分类按固定相性质及外形分类 柱色谱柱色谱: 固定相装在柱管内的色谱分析法 纸色谱纸色谱: 固定相为滤纸的色谱分析法 薄层色谱薄层色谱: 固定相压成或涂成薄膜的色谱分析法2022-5-31（三）（三）（三）HPLCHPLCHPLC的主要分离类型和原理：的主要分离类型和原理：的主要分离类型和原理： 高效液相色谱法按分离机理的不

8、同主要分为四类：高效液相色谱法按分离机理的不同主要分为四类：1. 液液-固吸附色谱（固吸附色谱（liquid-solid adsorption chromatography） 固定相固定相：固体吸附剂。如硅胶、氧化铝等，较常使用的是：固体吸附剂。如硅胶、氧化铝等，较常使用的是510m的硅胶吸附剂；的硅胶吸附剂； 流动相流动相：主要是非极性的烃类（如己烷、庚烷）并加入少：主要是非极性的烃类（如己烷、庚烷）并加入少量极性溶剂作缓和剂（如水、甲醇）。量极性溶剂作缓和剂（如水、甲醇）。 基本原理基本原理：组分在固定相吸附剂表面对不同物质吸附能力：组分在固定相吸附剂表面对不同物质吸附能力不同使混合物分离

9、的；吸附力越强不同使混合物分离的；吸附力越强,保留时间越长保留时间越长,反之反之,保保留时间短留时间短,。 适用于分离分子质量中等适用于分离分子质量中等 （2001000 ）的油溶性试样或）的油溶性试样或极性较小的植物色素等组分，大多数用于非离子型化合极性较小的植物色素等组分，大多数用于非离子型化合物，。常用于分离同分异构体不适宜于分离强极性的离子物，。常用于分离同分异构体不适宜于分离强极性的离子型化和物和同系物。型化和物和同系物。 缺点缺点：非线形等温吸附常引起峰的拖尾（离子型化合物易：非线形等温吸附常引起峰的拖尾（离子型化合物易产生拖尾）；产生拖尾）；2022-5-312. 2. 2. 2

10、. 2. 2. 液液液液液液- - -液分配色谱液分配色谱液分配色谱液分配色谱液分配色谱液分配色谱（liquid- liquid partitionliquid- liquid partitionliquid- liquid partition chromatographychromatographychromatography） 固定相与流动相均为液体，固定相与流动相均为液体，流动相与固定相之间应互不相溶（极性不同，避免固定液流失），有一个明显的分界面。当试样进入色谱柱，溶质在两相间进行分配。达到平衡时，服从于下式： K= 式中，Cs溶质在固定相中浓度；Cm-溶质在流动相中的浓度；在同一色谱

11、条件下，样品中K值大的组分保留值大；后流出色谱柱；K值小的组分则滞留时间短，先流出色谱柱。混合物中各组分的分配系数相差越大，越容易分离。msCC2022-5-31基本原理基本原理：组分在固定相和流动相上的分配；是：组分在固定相和流动相上的分配；是根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度根据被分离的组分在流动相和固定相中溶解度不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。不同而分离。分离过程是一个分配平衡过程。固定相：固定相：将特定的液态物质涂于担体表面，或化将特定的液态物质涂于担体表面，或化学键合于担体表面而形成的学键合于担体表面而形成的 液液色谱法液液色谱法按固定相和流动相的按固定相和流动相的极性