植物组织培养设备及条件

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1、第二章第二章 实验室实验室设计设计和和培养培养条件条件第一节第一节 实验室设计及基本技术实验室设计及基本技术第二节第二节 植物组织培养所要求的环境条件植物组织培养所要求的环境条件第一节第一节 实验室设计及实验室设计及基本技术基本技术一、实验室组成一、实验室组成二、仪器设备二、仪器设备三、培养器皿三、培养器皿及实验用具及实验用具四、洗涤技术四、洗涤技术五、灭菌技术五、灭菌技术六、无菌操作六、无菌操作 组织培养实验室布局的总体要求组织培养实验室布局的总体要求 便于隔离便于隔离 便于操作便于操作 便于灭菌便于灭菌 便于观察便于观察一一、实验室组成基本实验室基本实验室辅助实验室辅助实验室实验室实验室组

2、成组成准备室准备室缓冲室缓冲室无菌操作室无菌操作室培养室培养室细胞生物学实验室细胞生物学实验室温温 室室生化分析实验室生化分析实验室水槽水槽实实验验台台搁搁架架培养架培养架培养架培养架培培养养架架培培养养架架药药品品及及仪仪器器柜柜无菌台无菌台无菌台无菌台搁搁架架拉拉窗窗冰箱冰箱搁搁 架架电电炉炉门门4.5m3.0m3.5m4.0m准备室准备室缓冲室缓冲室无菌室无菌室培养室培养室组织培养准备实验室组织培养准备实验室准备室准备室缓缓 冲冲 室室无无 菌菌 室室无无 菌菌 室室培培 养养 室室培养架培养架培养间二、仪器设备二、仪器设备1）、基本仪器设备 冰箱、电（磁）炉、酸度计、纯水器、天平、移液

3、器、解剖镜、光照培养箱、摇床、生化培养箱、培养基分装器、搅拌器等。冰箱冰箱酸度计酸度计电炉电炉天平天平纯水纯水器培养基分装器培养基分装器搅拌器搅拌器摇 床体式显微镜体式显微镜倒置显微镜倒置显微镜冷光源冷光源 电磁搅拌器电磁搅拌器摇床摇床 2）、）、灭菌设备灭菌设备 蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。蒸汽压力灭菌锅蒸汽压力灭菌锅高压灭菌器干热消毒柜干热消毒柜75%酒精喷雾器酒精喷雾器喷雾消毒器喷雾消毒器3）、）、无菌操作设备无菌操作设备 超净工作台超净工作台二、设备、仪器二、设备、仪器超净工作台超净工作台

4、（一）设备（一）设备1.紫外线灭菌灯紫外线灭菌灯 2.日光灯日光灯 3.工作台工作台 4.凳子凳子 5.搁物架搁物架 6.窗窗 7.推拉门推拉门 8.缓冲间缓冲间无菌接种箱无菌接种箱4、细胞培养设备、细胞培养设备 摇 床培养架培养架HZC-250恒温振荡培养箱恒温振荡培养箱 150C 250D 光照培养箱光照培养箱 光照培养箱光照培养箱烘箱烘箱5、细胞学鉴定设备、细胞学鉴定设备 光学显微镜、体视光学显微镜、体视显微镜、倒置显微镜显微镜、倒置显微镜倒置显微镜倒置显微镜光学显微镜光学显微镜电子天平电子天平（0.0001g， 0.001g） 酸度计酸度计1、玻璃器皿、玻璃器皿三、培养器皿及实验用具三

5、、培养器皿及实验用具培养皿培养皿三角瓶三角瓶培养瓶培养瓶2、金属材质用具、金属材质用具镊子镊子 解剖刀解剖刀接种针接种针（二）各类器皿（二）各类器皿 1 1器皿的类型器皿的类型（1 1）培养器皿）培养器皿三角瓶三角瓶、培养瓶、圆形培养瓶、培养瓶、圆形培养瓶、试管试管、L L形管和形管和T T形管形管 （2 2）分注器）分注器 （3 3）刻度移液管）刻度移液管（4 4）微量移液器微量移液器（5）细菌过滤器细菌过滤器（三）器械用具（三）器械用具 打孔器打孔器 镊子镊子 解剖刀解剖刀 接种针接种针 剪刀剪刀 电热灭菌器电热灭菌器 四、洗涤技术四、洗涤技术1、玻璃器皿洗涤、玻璃器皿洗涤已用过的玻已用过

6、的玻璃璃器皿器皿浸渍浸渍12h洗衣粉洗洗衣粉洗涤涤清水清水冲洗冲洗晾干晾干备用备用新购置玻璃新购置玻璃器皿器皿2、塑料用品洗涤、塑料用品洗涤新的塑料器皿打开即用新的塑料器皿打开即用已用过的塑已用过的塑料器皿料器皿2%NaOH浸泡浸泡12h清水冲清水冲洗洗2%5%盐酸盐酸浸泡浸泡30min清水清水冲洗冲洗蒸馏水冲蒸馏水冲洗洗晾干备用晾干备用3、金属用品洗涤、金属用品洗涤热洗衣粉水热洗衣粉水洗净洗净冲洗冲洗擦干擦干五、灭菌技术五、灭菌技术物理方法物理方法：干干热、湿热、射线处理、过滤除菌等热、湿热、射线处理、过滤除菌等化学方法化学方法： 消毒剂、抗菌素灭菌消毒剂、抗菌素灭菌1、灭菌方法、灭菌方法2

7、、灭菌、灭菌（1）培养基灭菌：高温高压湿热灭菌法 压力在0.1M0.2MPa 温度在121 灭菌1030min（2）玻璃器皿灭菌：蒸汽高压消毒灭菌 干热消毒灭菌饱和蒸汽压力与其对应的温度饱和蒸汽压力与其对应的温度饱和蒸汽压力饱和蒸汽压力温度（温度（）饱和蒸汽压力饱和蒸汽压力温度（温度（）kg/cm21b/m2kg/cm21b/m20.00.1410.2810.4420.5630.7030.8440.98402468101214100103.6106.9109.8112.6115.2117.6119.91.0551.1251.2661.4061.5431.68115161820222430501

8、21.0122.0124.1126.0127.8129.6134.5147.6（3）塑料器皿灭菌：塑料器皿灭菌： 多采用多采用高压蒸汽消毒灭菌高压蒸汽消毒灭菌（4）金属用具灭菌：）金属用具灭菌：灼烧灭菌灼烧灭菌 浸入浸入95%酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷酒精，后置于酒精火焰上灼烧，冷却后使用却后使用（5）接种室灭菌）接种室灭菌空气消空气消毒灭菌毒灭菌接种室接种室超净工超净工作台作台紫外灯紫外灯照射照射70%75%的酒精擦洗的酒精擦洗培养材料培养材料的接种的接种紫外灯紫外灯照射照射（6）外植体灭菌）外植体灭菌流水冲洗流水冲洗1020min或更长时间或更长时间70%75%酒精中浸泡酒精中浸泡30

9、s0.1%0.2%氯化汞氯化汞液中浸泡液中浸泡10min左右左右蒸馏水冲洗蒸馏水冲洗45次次在在10%的的次氯酸钠次氯酸钠、饱和饱和漂白粉漂白粉浸泡浸泡30min左右左右备用备用常用消毒剂消毒灭菌比较表常用消毒剂消毒灭菌比较表消毒剂消毒剂使用浓度使用浓度（%）去除难易去除难易消毒时间消毒时间（min）效果效果次氯酸钙次氯酸钙次氯酸钠次氯酸钠漂白粉漂白粉溴水溴水过氧化氢过氧化氢升汞升汞酒精酒精抗生素抗生素硝酸银硝酸银9102饱和溶液饱和溶液1210120.11707545（mg/L1易易易易易易易易最易最易较难较难易易中中较难较难5305305302105152100.223060530很好很好

10、很好很好很好很好很好很好好好最好最好好好较好较好好好 消毒消毒，更换实验服、帽子与鞋子，进入接，更换实验服、帽子与鞋子，进入接种室。种室。 打开打开超净工作台和无菌操作室的紫外灯，超净工作台和无菌操作室的紫外灯，照射照射40min左右，后关闭。左右，后关闭。 开启过滤风机开启过滤风机，使无菌风吹拂工作台面和，使无菌风吹拂工作台面和四周的台壁。四周的台壁。 用用70%75%的酒精擦拭工作台和双手的酒精擦拭工作台和双手。（7）接种准备）接种准备六、无菌操作六、无菌操作实验员消毒实验员消毒实验室、无实验室、无菌台灭菌菌台灭菌实验器材实验器材的灭菌的灭菌无菌接种无菌接种消消 毒毒实验台实验台卫生卫生培

11、养室培养室培养培养 植物组织培养是在严格植物组织培养是在严格无菌的条件下无菌的条件下进行的，要做到无菌的条进行的，要做到无菌的条件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要件，需要一定的设备、器材和用具，同时还需要人工控制温度、人工控制温度、光照、湿度光照、湿度等培养条件。等培养条件。 准备室准备室：器具的洗涤、干燥、保存、灭菌，各种药品的储备、：器具的洗涤、干燥、保存、灭菌，各种药品的储备、称量、溶解、配制、培养基分装等，称量、溶解、配制、培养基分装等，设备：设备：药品柜、防尘厨、冰药品柜、防尘厨、冰箱、天平、纯水仪、酸度计、操作台、灭菌锅、烘箱。箱、天平、纯水仪、酸度计、操作台、灭菌锅、烘箱