植物生物技术 7第六章 原生质体培养.ppt

第六章 原生质体培养
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第一节 原生质体研究的发展和应用
第二节 原生质体的分离与纯化
第三节 原生质体培养及植株再生
本章主要内容
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名词：原生质体
了解原生质体培养的应用
掌握原生质体分离的步骤
掌握原生质体培养的方法
本章教学目的与要求
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细胞的基本结构：
细胞是生命活动的基本单位。生物体的各项生命活动及生命的生理、行为特点都是建立在细胞这一特殊结构基础之上的
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第一节 原生质体的应用
原生质体（Protoplast）:指采用机械或酶解法去掉细胞壁的裸露细胞
由于没有细胞壁，原生质体为作物遗传改良和植物学研究提供了极为有利的试验材料。
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一、原生质体的应用
种质资源保存
原生质体融合，克服生殖障碍
筛选突变体
遗传转化
同一组织可产生大量遗传上基本一致的原生质体
如具有再生能力，易获得转化植株
易摄取外源遗传物质
转化后固体包埋培养，可避免嵌合体的发生
基础研究：细胞壁的发生过程、膜的结构等的研究
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二、研究举例棉花细胞壁再生相关基因的表达分析
1、材料与方法
C201胚性愈伤中分离原生质体
转移到细胞壁再生培养基上培养
0, 3, 6, 12, 18, 24, 48小时取样
提取RNA
SSH分析，RT-PCR
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细胞壁的亚显微结构图解
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2、结果分析
棉花原生质体细胞壁48小时内再生
Calcofluor White 染色
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（1）棉花原生质体在培养后48小时内重建细胞壁
0h (Fig. 1A, B)6 h (Fig. C, D)12h (Fig. E, F)18h (Fig. G, H)24h (Fig. I, J)36h (Fig. K,L)48h (Fig. M, N)72h (Fig. O, P)
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