微生物检验基本技能

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1、微生物检验基本技能微生物检验基本技能微生物及免疫学科组微生物及免疫学科组内内 容容无菌技术无菌技术安全要求安全要求微生物分离培养（细菌）微生物分离培养（细菌）微生物保藏微生物保藏微生物检验技术微生物检验技术1.形态学检测技术（染色、镜检技术）形态学检测技术（染色、镜检技术）2.培养特征检测技术（计数、生长性状）培养特征检测技术（计数、生长性状）3.基于生理生化特征的检测技术基于生理生化特征的检测技术 4.致病性检测技术致病性检测技术5.药物敏感性检验技术药物敏感性检验技术6.血清学检测技术血清学检测技术 微生物检验技术微生物检验技术7.免疫荧光抗体技术免疫荧光抗体技术8.酶联免疫技术酶联免疫技

2、术9.放射免疫分析技术放射免疫分析技术10.免疫金技术免疫金技术11.抗体芯片技术抗体芯片技术12.复合检测技术复合检测技术 免疫免疫PCR技术技术13. 微生物自动化仪器与检测技术微生物自动化仪器与检测技术 14. 生物传感器检测技术生物传感器检测技术 微生物微生物分子生物学分子生物学检验技术检验技术核酸探针技术，核酸探针技术，PCR技术，技术，环介导等温扩增技术，环介导等温扩增技术，荧光定量荧光定量PCR技术，技术，固相基因芯片技术，固相基因芯片技术，液相基因芯片技术。液相基因芯片技术。一、消毒与灭菌一、消毒与灭菌 消毒消毒(disinfection)：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定

3、：杀死物体上病原微生物的方法，并不一定能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒能杀死含芽胞的细菌或非病原微生物。用以消毒的药品称为消毒剂剂(disinfectant)。 灭菌灭菌(sterilization)：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消：杀灭物体上所有微生物的方法。灭菌比消毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微毒要求高，包括杀灭细菌芽胞在内的全部病原微生物和非病原微生物。生物。 抑菌抑菌(bacteriostasis)：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用：抑制体内或体外细菌的生长繁殖。常用的抑菌剂为各种抗生素。的抑菌剂为各种抗生素。 防腐防腐(ant

4、isepsis)：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌：防止或抑制体外细菌生长繁殖的方法。细菌一般不死亡。一般不死亡。 无菌无菌(asepsis)：不存在活菌。：不存在活菌。热力灭菌法热力灭菌法辐射杀菌法辐射杀菌法滤过除菌法滤过除菌法超声波杀菌法超声波杀菌法干燥与低温抑菌法干燥与低温抑菌法物理消毒灭菌法物理消毒灭菌法v干热灭菌法干热灭菌法 焚烧：废弃物、尸体焚烧：废弃物、尸体 灼烧：接种环、试管口灼烧：接种环、试管口 干烤：玻璃器皿干烤：玻璃器皿 红外线：医疗器械红外线：医疗器械v湿热灭菌法湿热灭菌法 巴氏消毒法：巴氏消毒法：61.6-62.8 30min或或71.7 15-30s,主要用于

5、牛乳消毒。主要用于牛乳消毒。 煮沸法煮沸法 流动蒸汽消毒法流动蒸汽消毒法 间歇蒸汽消毒法间歇蒸汽消毒法 高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法 热力灭菌法热力灭菌法 紫外线紫外线 波长波长200-300nm的紫外线具有杀菌作用。的紫外线具有杀菌作用。 其主要作用于其主要作用于DNA，使一条，使一条DNA链上相邻的两个胸腺嘧链上相邻的两个胸腺嘧 啶共价结合形成二聚体，导致细菌变异和死亡。啶共价结合形成二聚体，导致细菌变异和死亡。 电离辐射电离辐射 高速电子、高速电子、X射线、射线、射线射线 微波微波 波长波长1mm1m辐射杀菌法辐射杀菌法v赛氏滤器赛氏滤器v玻璃滤器玻璃滤器v薄膜滤器薄膜滤器滤过除菌法滤过

6、除菌法消毒剂的种类：消毒剂的种类：酚类、醇类、重金属盐类、氧酚类、醇类、重金属盐类、氧化剂、表面活性剂、烷化剂。化剂、表面活性剂、烷化剂。消毒剂的应用：消毒剂的应用：病人排泄物与分泌物、皮肤、病人排泄物与分泌物、皮肤、粘膜、饮水、厕所、空气、手。粘膜、饮水、厕所、空气、手。化学消毒灭菌法化学消毒灭菌法 消毒剂的性质、浓度与作用时间消毒剂的性质、浓度与作用时间 微生物的种类与数量微生物的种类与数量 温度温度 酸碱度酸碱度 有机物有机物影响消毒灭菌效果的因素影响消毒灭菌效果的因素二、二、 培养基培养基(culture medium)培养基：是由人工方法培配置而成的，专供微生培养基：是由人工方法培配

7、置而成的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养物制品。物生长繁殖使用的混合营养物制品。 营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是微生营养物质是微生物生存的物质基础，而营养是微生物维持和延续其生命形式的一种生理过程。物维持和延续其生命形式的一种生理过程。营养物质营养物质: :能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理能够满足机体生长、繁殖和完成各种生理 活动所需要的物质。活动所需要的物质。营养营养: :微生物获得和利用营养物质的过程。微生物获得和利用营养物质的过程。 基本概念基本概念细菌的营养物质细菌的营养物质二二. 细菌的营养物质：细菌的营养物质：水、碳源、氮源、无机盐、生长因子。水、碳源、氮源、无机盐

8、、生长因子。二、营养物质及其生理功能二、营养物质及其生理功能u微生物的营养要求微生物的营养要求碳源碳源氮源氮源能源能源无机盐无机盐生长因子生长因子水水类类型型元素水平元素水平 化合物水平化合物水平 培养基原料水平培养基原料水平有有机机碳碳C CH HO ON NX X复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、蛋白胨、牛肉膏、蛋白胨、 花生饼粉等花生饼粉等C CH HO ON N多数氨基酸、简单蛋白多数氨基酸、简单蛋白质等质等一般氨基酸、明胶等一般氨基酸、明胶等C CH HO O糖、有机酸、醇、脂类糖、有机酸、醇、脂类等等葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、葡萄糖、蔗糖、各种淀粉、糖蜜等糖蜜等C CH H

9、烃类烃类天然气、石油及其不同馏份、天然气、石油及其不同馏份、石蜡油等石蜡油等无无机机碳碳C(?)C(?)C CO OCOCO2 2COCO2 2C CO OX XNaHCONaHCO3 3NaHCONaHCO3 3、CaCOCaCO3 3、等、等微生物的碳源谱微生物的碳源谱类类型型 元素水平元素水平化合物水平化合物水平培养基原料水平培养基原料水平有有机机氮氮N NC CH HO OX X复杂蛋白质、核酸等复杂蛋白质、核酸等牛肉膏、酵母膏、饼粕牛肉膏、酵母膏、饼粕粉、蚕蛹粉等粉、蚕蛹粉等N NC CH HO O尿素、一般氨基酸、简单蛋白尿素、一般氨基酸、简单蛋白质等质等尿素、蛋白胨、明胶等尿素、

10、蛋白胨、明胶等无无机机氮氮N NH HNHNH3 3、铵盐等、铵盐等(NH4)(NH4)2 2SOSO4 4等等N NO O硝酸盐等硝酸盐等KNOKNO3 3等等N NN N2 2空气空气微生物的氮源谱微生物的氮源谱u微生物的营养要求微生物的营养要求3.3.能源能源能为微生物的生命活动提供最初能量来源营养物或辐射能能为微生物的生命活动提供最初能量来源营养物或辐射能能源谱能源谱化学物质化学物质辐射能辐射能化能异养微生物的能源化能异养微生物的能源有机物有机物无机物无机物化能自养微生物的能源化能自养微生物的能源光能自养和光能异养微生物的能源光能自养和光能异养微生物的能源u微生物的营养要求微生物的营养

11、要求4.4.生长因子生长因子那些微生物生长所必需而且需要量很小，但微生物那些微生物生长所必需而且需要量很小，但微生物自身不能合成的或合成量不足以满足机体生长需要自身不能合成的或合成量不足以满足机体生长需要的有机化合物的有机化合物 。微微 生生 物物生长因子生长因子需要量（需要量（mlml-1-1）IIIIII型肺炎链球菌型肺炎链球菌胆碱胆碱6ug6ug金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌硫胺素硫胺素0.5ng0.5ng白喉棒杆菌白喉棒杆菌B-B-丙氨酸丙氨酸1.5ug1.5ug破伤风梭状芽孢杆菌破伤风梭状芽孢杆菌尿嘧啶尿嘧啶0-4ug0-4ug肠膜状串珠菌肠膜状串珠菌吡哆醛吡哆醛0.025ug0.02