荧光定量PCR技术讲座

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CT LogX0与循环数呈线性关系，通过已知起始拷贝数的标准品可作出标准曲线，根据未知样品Ct值，就可以在标准曲线上计算出未知样品初始模板量。 该方法的前提条件是目的基因和内参基因的扩增效率相同且都为1，在试验开始前必须分别对目的基因和内参基因作标准曲线，看两者扩增效率的差别，假如两者扩增效率之间的差异小于0.1，就可以用该方法分析。而且在接下来的实验中，无需再做标准品。 该方法要求严格的重复，因为CT值的差异只要有很小的变化，测得的结果就会有很大的差别。 该方法特别适合于样品量不大，但是检测的基因种类很多的情况。 物一般都是引物TM值为60左右，探针的TM值为70左右。探针中GC含量的差异对定量PCR反应效率的影响定量PCR反应体系普通PCR结果电泳图添加荧光基团后PCR结果电泳图优化后的Taqman探针体系实验结果，定量PCR实验方案荧光染料法Taqman探针法双标准曲线法双标准曲线法同一cDNA样品的三个重复通过定量PCR检测，测得该阴性样品中含有227个初始模板。假如这个污染属于是顽固的未知污染，可以用正常样品测得的初始模板量减去227，来避免污染引起的误差谢谢 谢！谢！