真核细胞RNA的制备和逆转录PCR-毛宇彬

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1、实验五实验五 真核细胞真核细胞RNA的制备的制备和和n RNARNA通常以单链形式通常以单链形式存在，但也可形成局部存在，但也可形成局部的双螺旋结构。的双螺旋结构。n RNARNA分子的种类较多，分子的种类较多，分子大小变化较大，功分子大小变化较大，功能多样化。能多样化。RNA的种类、分布、功能的种类、分布、功能核核蛋蛋白白体体RNA信信使使RNA转转运运RNA核核内内不不均均一一RNA核核内内小小RNA胞胞浆浆小小RNA 细细胞胞核核和和胞胞液液线线粒粒体体功功能能rRNAmRNA mt rRNAtRNAmt mRNAmt tRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA

2、核核蛋蛋白白体体组组分分蛋蛋白白质质合合成成模模板板转转运运氨氨基基酸酸成成熟熟mRNA的的前前体体参参与与hnRNA的的剪剪接接、转转运运rRNA的的加加工工、修修饰饰蛋蛋白白质质内内质质网网定定位位合合成成的的信信号号识识别别体体的的组组分分核核仁仁小小RNA核核蛋蛋白白体体RNA信信使使RNA转转运运RNA核核内内不不均均一一RNA核核内内小小RNA胞胞浆浆小小RNA 细细胞胞核核和和胞胞液液线线粒粒体体功功能能rRNAmRNA mt rRNAtRNAmt mRNAmt tRNAHnRNASnRNASnoRNAscRNA/7SL-RNA 核核蛋蛋白白体体组组分分蛋蛋白白质质合合成成模模板

3、板转转运运氨氨基基酸酸成成熟熟mRNA的的前前体体参参与与hnRNA的的剪剪接接、转转运运rRNA的的加加工工、修修饰饰蛋蛋白白质质内内质质网网定定位位合合成成的的信信号号识识别别体体的的组组分分核核仁仁小小RNAn掌握逆转录聚合酶链反应的基本原理、实验基本条件n熟悉PCR反应条件的优化和注意事项，PCR引物设计的基本原则，定量PCR的原理和用途。组织细胞：新鲜动物肝脏塑料制品： 尽可能使用无菌、一次性塑料制品，已标明 RNase-Free 的塑料制 品，如没有开封使用过通常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下： 1在玻璃烧杯中注入去离子水，加入 DEPC

4、（焦碳酸二乙酯） 使 DEPC 的终浓度为 0.1%。注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通 风柜中使用。2处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入 DEPC 水溶液， 使塑料制品的所有部分都浸泡到溶液中。 3在通风柜中室温处理过夜。 4将 DEPC 水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住DEPC 水处理 过的塑料制品的烧杯，7080烘拷干燥，高温高压蒸气灭菌至少 30 分钟。 5烘箱用合适的温度（7080）烘拷至干燥。置于干净处备用。 玻璃和金属物品：250 烘烤3小时以上或180烘烤8小时。 其它试剂：无水乙醇、氯仿 、DEPC处理过的水、75%乙醇（用DEPC处理水 配制）、0.5%（m/V）SDS（DEPC处理）三、方法和步骤三、方法和步骤四、注意事项琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶电泳琼脂糖凝胶分辨琼脂糖凝胶分辨DNA片段的范围为片段的范围为0.250kb之间之间附：各种组织细胞附：各种组织细胞RNA产量产量