显微与电镜技术.

《显微与电镜技术.》由会员分享，可在线阅读，更多相关《显微与电镜技术.（65页珍藏版）》请在文档大全上搜索。

1、 生物显微技术与电镜技术目录第一篇 生物显微制片技术第一章 概论 第一节 制片的目的和任务第二节 生物制片的分类法第二章 生物显微制片的步骤和原理第一节 取材和固定第二节 洗涤和脱水第三节 透明和透明第四节 浸透及包埋第五节 切片第六节 贴片脱蜡与染色第七节 封固第三章 其它切片法第一节 冷冻切片法第二节 火棉胶制片法第二篇 显微照相术 第一章 显微镜第一节 显微镜的种类第二节 显微镜的光学原理第三节 显微镜的使用及其注意事项第四节 各种显微镜第二章 显微镜几种常用的附件第一节 游标尺的使用第二节 显微测微尺第三节 描绘器第四节 投影屏和投影目镜第五节 共览装置第三章 显微照相术第一节 不同类

2、型的显微照相装置及其功能第二节 显微照相对物镜、目镜及聚光镜的选择第三节 照相的程序第三篇 电子显微技术第一章 概论第二章 电子显微镜的原理和结构第一节 电子显微镜的原理第二节 电子显微镜的结构第三章 扫描电子显微镜第一节 扫描电镜的一些基本概念第二节 扫描电镜的原理及特点第四章 电镜生物样品的制备第一节 透射电镜生物样品的制备 -超薄切片的方法第二节 扫描电镜生物样品的制备附录一 制片技术实例 实验一 涂布法 实验二 石蜡切片法（一） 实验三 石蜡切片法（二）实验四 透射电子显微镜生物标本的制备方法实验五 扫描电子显微镜样品的制备方法第一篇 生物显微制片技术第一章 概论 第一节 制片的目的和

3、任务制片技术是生物科学必不可少的研究手段。人类生活在大自然中，虽很早就认识和研究自然界中形形色色的生物，但起初只限于在外部形态、种类以及生长发育等方面的研究，对于内部细微结构的奥秘，直到十七世纪中叶发明了显微镜后，才开始借助工具进行探索。当时限于工具的简陋及科学发展的水平，观察和研究的方法是十分简单的，到了址九世纪，由于工业革命促进了物理学和化学的发展，进而为显微技术革新的发展提供了丰富的知识和新技术装备，使显微技术产生了根本性的变化。制片技术就是在这样的基础上形成为一门新的学科，从而推动生物科学和日益发展。当然，生物科学迅速发展，也要求投影片技术的内容更加充实和完备，以达到各种观察和研究的目

4、的。由于各种材料的性质及观察研究的目的不同，要制成适合于显微镜下观察的薄片，并要显示出结构的正确的清晰，因而产生了多种制作生物制片的技术和方法。如平时观察细小透明的生物体或组织材料，可无需经切片手续，只需封在一滴水中就能在显微镜下进行观察；对易于分离的组织，可在载波片上涂上一层薄层，经染色或不染色做成涂片；大而复杂的材料，可以用刀或用切征机切成薄片；若要进一步研究其细微的结构，尚须经过若干制片步骤；为了显示组织间更加清晰的结构，还可进一步染色等等。总之，制片方法是极其繁多的，而且仍在不断地发展和充实。由于制片技术在生物科学的领域内占有重要的地位，因此已成为生物学工作必须掌握的一项技术，也是水产

5、养殖学科不可或缺的基本研究手段之一。本篇以石蜡制片技术为主线来阐述制片的基本方法和原理，在掌握基本方法和原理的基础上，其他生物制片法则可融会贯通，以便在工作中达到灵活应用的目的。 第二节生物制片的分类法 生物制片的种类，从不同的角度出发其分类是不一的，如从保存时间的长短可分为“临时制片”和“永久制片”两大类，而目的常根据其制片的方法来分，采用如下的分类方法：一、 活体观察将生物的个体或其一部分，就其原来的状态置于载波片上，加上一滴水和盖波片进行镜检，从而达到预定的检查目的。此法既简便而且又节省时间，并能观察到活体的情况，也不需要什么特殊的设备，但因此法未经过其他处理，常常因组织过厚，光线不易透

6、过，且活体材料又多为无色透明的，结果常难取得满意的效果，同时不易作长期的保存。二、 切片法即是利用锋利的刀具将材料切成薄片。简便的切片法即是利用刀片或剃刀将材料切成薄片后，置于载玻片上加盖进行活体观察；或经处理、染色等步骤做成制片，此法可制成临时制片，必要时亦可制成永久制片。该切片法在制片技术中甚为重要，因为无需特殊设备便能及时地观察到生活组织的内部结构。另处，有些研究有必要先作简单切片进行观察，才能决定材料是否符合目的和要求。完善的切片法如石蜡切片法，火棉胶切片法等，需要经过一系列的过程和各种药剂，染色剂处理，手续甚为复杂，而且要有一定的设备，这些方法由于经过了各种处理，使组织内所含万分发生

7、物理和化学的作用，而显示其差异，以便于观察和研究，同时可用长时间的保存。因此，切片法在生物显微片技术中占有极其重要的地位。三、 非切片法所谓非切片法，即是指不经切片手续，但其不同于活体观察法之点是：此法常经过药剂的处理，这样组织常被杀死后并经染色做成临时或永久制片。或包括：（1） 整体封藏法：用这种方法制片，一般是身体很小或自身为一薄片的低等动物，如无脊椎动物的水螅、草覆虫等。或脊椎动物胚胎材料：如鸡胚、蛙胚、猪胚等。也可取下某一动物体的某部分器官制成封片的，如昆虫的翅、鸟的羽毛、鱼的鳞片等等。这些材料取下后经固定、脱水、染色等手续就可封藏于玻片内而不需用切片机来切片。（2） 涂片法：主要是液

8、体或半流动的材料，不能切成薄片则可涂在玻片上，再经固定与染色等手续制成标本。如：血液、精液、尿、痰、粪便等，还有细胞学的检查，微生物及原生动物等也可用涂片法制片。（3） 磨片法：主要用于含有钙盐等矿物质等万分坚硬的材料，如脊椎动物的牙齿、坚骨、软体动物的介壳、珊瑚虫的骨骼等可不经切片制成磨片标本。（4） 分离法：为了要观察研究在组织或器官里的单个细胞或纤维的形状，必须设法使细胞与细胞的间质消除，细胞便各自分离开来，再经染色后制成切片的方法叫分离法。一般有二种方法： 浸渍分离法：是利用药品使细胞间质溶解，细胞便能自动分离开来，取出单个细胞经过染色、脱水、透明等处理封成片子。 撕碎法：材料经固定或

9、浸渍到一定的程度后用解剖针在解剖镜下撕开的方法，如观察单个的神经纤维即可用此种方法制片。（5） 压碎法：一些柔软的材料可夹在玻片或盖玻片间进行压碎或压开染色后进行观察。第二章生物显微制片的步骤和原理 前面已经提到生物显微制片的方法很多，其制片也繁简不一，为了叙述方便和便于学习，本章采用应用最广泛，过程复杂完善的制片方法石蜡制片法予以叙述。 从动物体取下材料开始，到制成切片标本为止，其间必须经过以下各个步骤：（1） 取材与固定：这是制片切片的第一步，首先必须把动物体的组织杀死，度设法把他原来的结构保存下来，以但观察研究，一般用化学药品把它固定，这种化学药品称为固定剂，它有杀死兼固定和硬化细胞组织

10、的作用。（2） 洗涤：组织经过一定的固定时间以后，内部渗入很多固定剂，必须及时地把渗入里面的固定剂洗支，否则固定剂作用过久会产生一些不良后果，如影响染色、产生结晶等，所以在固定以后必须用水冲洗干净。（3） 脱水：组织中含有大量水分，必须用一些有机溶剂，称为脱水剂的以驱除里面的水分，以利组织的保存和下一步的透明，浸蜡诸步骤的进行。因为透明剂和石蜡与水是不能相溶的，所以必须先脱支水分，方能进行以下步骤。（4） 透明：其目的是便于浸蜡包埋。因为石蜡不能与脱水剂混合，只能与透明剂混合，因此在脱水后组织里充满的脱水剂必须用透明剂所代替，这样才能使石蜡熔剂渗入。（5） 浸蜡：组织块在完全透明后，支持剂石蜡

11、等就容易透入，它的目的一方面使组织变硬有利于切片，另处也使组织块内各组分间的相互位置保持一定，基本上维持生活时的状况。石蜡的透入需要在一定的温度下才能进行。（6） 包埋：把透足石蜡的组织包埋在石蜡里，成为一定的开形状以便切片。（7） 切片：把包埋好的组织块用切片机进行切片，根据观察的要求确定切取的方向和厚度。（8） 贴片：用粘贴剂使切出的薄片平铺粘贴在载玻片上以便于染色和观察。一般常用甘油蛋白贴剂。（9） 脱蜡与染色：石蜡作为支持剂在切片和贴片后就完成了使命。为便于观察，须脱支石蜡并对切片进行染色，染色的其目的是使细胞或组织的各部分染上不同的颜色，产生不同的折射率以显示它不同的构造。染色方法有